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基礎信息Product information
產品名稱:

小鼠胚胎肢芽間充質干細胞

產品簡介:

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產品型號:

廠商性質:經銷商

訪問量:1274

更新時間:2025-04-09

產品特性Product characteristics

小鼠胚胎肢芽間充質干細胞

小鼠胚胎肢芽間充質干細胞

商品屬性:

組織來源

產品規格

細胞形態

貨號

胚胎

5×105cells/T25細胞培養瓶

成纖維細胞樣

YS-01X8520

細胞簡介:

小鼠胚胎肢芽間充質干分離自胚胎肢芽;胚胎肢芽存在于兩棲類以上的大多數脊椎動物胚胎中,在四肢發生的初期階段,在身體兩側有呈芽狀的突起,內部是中胚層側板的體壁板垱厚形成,表面有表皮覆蓋。在這個中胚層區肢芽迅速伸長,不久,在其前端即見有指的突起。在此時期間,其內部的中胚層分化成軟骨、肌肉等。這些分化組織,在將肢芽作分離培養的時候也可以獲得。根據對兩棲類的有尾類的研究,作為肢原基各部的胚發能力,肢芽物質的大部分是位于背半部,而前半部主要參與基部形成,后半部參與前端的形成。在實驗上,即使將肢的原基分成二半,每一半調整好都可形成基本上近于正常形態的肢體,而且肢體各軸的極性和側性也逐漸決定。間充質干細胞(MSC)是屬于中胚層的一類多能干細胞,主要存在于結締組織和器官間質中,是具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞;這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量,并在特定條件下轉變成為一種或多種構成機體組織或器官的細胞,從而在組織修復等方面發揮積極作用。

原代細胞的培養條件:

  一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

  1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;

  2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;

  3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;

  4、 胎牛血清濃度為10%-80%

  5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;

  6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂浮;

  7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;

  8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。

  二、懸浮細胞培養

  1、原代培養時要盡量去除紅細胞;

  2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行;

  3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;

  4、長期培養時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;

  5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;

  6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介:

實驗室分離的小鼠胚胎肢芽間充質干采用-膠原酶聯合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測:

實驗室分離的小鼠胚胎肢芽間充質經CD90免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息:

培養基:含FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性:貼壁

細胞形態:成纖維細胞樣

傳代特性:可傳2-3

消化液:0.25%

培養條件:氣相:空氣,95%CO25%

小鼠胚胎肢芽間充質干體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。

小鼠胚胎肢芽間充質干細胞

細胞傳代及凍存:

細胞傳代步驟細胞凍存步驟
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代細胞的培養方法一般有以下4種:

  ① 組織塊培養法

  組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

  ② 消化培養法

  ③ 懸浮細胞培養法

  對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

  ④器官培養

  器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。

小鼠胚胎肢芽間充質干細胞


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