倉(cāng)鼠DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3AELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

NRK-52E，大鼠腎細(xì)胞

H9c2大鼠心肌細(xì)胞（ATCC來源）

C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞

NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系

CHO, 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系

COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞

SF9, 昆蟲卵巢細(xì)胞

BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞

HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞

HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

GC-1, 鼠精原細(xì)胞

293A，人胚腎上皮細(xì)胞系（腺病毒包裝級(jí)別）

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞

293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細(xì)胞系

EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細(xì)胞

HBE, 正常人支氣管上皮細(xì)胞系

HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細(xì)胞

HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系

HUM, 正常人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

HAVSMC, 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

LX-2, 人肝星形細(xì)胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪細(xì)胞